一、實驗?zāi)康呐c意義 學習使用CaCl2法制作大腸桿菌感受態(tài)細胞，使學生掌握感受態(tài)細胞制作的基本原理和操作技術(shù)。 二、實驗原理 在自然條件下，很多質(zhì)粒都可通過細菌接合作用轉(zhuǎn)移到新的宿主內(nèi)，但在人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體中，一般缺乏此種轉(zhuǎn)移所必需的mob基因，因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉(zhuǎn)移。如需將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)移進受體細菌，需誘導受體細菌產(chǎn)生一種短暫的感受態(tài)以攝取外源DNA。 受體細胞經(jīng)過一些特殊方法[如電擊法，CaCl2，RbCl（KCl）等化學試劑法]的處理后，細胞膜的通透性發(fā)生了暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態(tài)細胞。目前常用的感受態(tài)細胞制備方法有CaCl2和RbCl（KCl）法，RbCl（KCl）法制備的感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化效率較高，但CaCl2法簡便易行，且其轉(zhuǎn)化效率完全可以滿足一般實驗的要求，制備出的感受態(tài)細胞暫時不用時，可加入占總體積15％的無菌甘油于-70℃保存（半年），因此CaCl2法為使用更廣泛。 為了提高轉(zhuǎn)化效率，實驗中要考慮以下幾個重要因素： 細胞生長狀態(tài)和密度：菌株生長至OD600 為0.5時，細胞密度在5×107 個/ml左右（不同的菌株情況有所不同），這時比較合適。密度過高或不足均會影響轉(zhuǎn)化效率。 一般情況下，DNA溶液的體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的5％。 整個操作過程均應(yīng)在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管、槍頭等最好是新的，并經(jīng)高壓滅菌處理，所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染，否則均會影響轉(zhuǎn)化效率或雜DNA的轉(zhuǎn)入，為以后的篩選、鑒定帶來不必要的麻煩。 三、實驗儀器

四、實驗材料? 培養(yǎng)過夜的DH5ɑ菌株 無菌槍頭1ml， 200μL各10支 1.5ml 離心管（無菌）每人4只