人 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白 ( COMP )ELISA 試劑盒

( 用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和生物體液內(nèi) )

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法。用抗人 COMP 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 COMP與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人 COMP ，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的 Streptavidin 與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液硫酸，在 450nm 處測 OD 值，COMP 濃度與 OD 值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中COMP 濃度。

試劑盒組成 （ 2-8 ℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長時(shí)間須冷凍（ -20 ℃或 -70 ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。 血清 、血漿 作 1： 2 稀釋（取 10 0ul，加 標(biāo)本 稀釋液 10 0ul,稀釋 2 倍）。 細(xì)胞培養(yǎng)上清可以不做稀釋直接檢測。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml 蒸餾水 混勻，配成 1000 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，第一管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在第一管中加入 1000 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二 管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4. 洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序

1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3. 每孔中加入第一抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8. 每孔加入100ul 終止液混勻。

9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1. 所有 OD 值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 15.6 、 0 ng /ml 為橫坐標(biāo)， OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 根據(jù)樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應(yīng) COMP 含量 ，再乘上稀釋倍數(shù)即可 。

試劑盒性能

1. 靈敏度 ： 最小的COMP 檢測濃度小于 8n g/ml。

2. 特異性： 可同時(shí)檢測重組或天然的人 COMP 。 不與 人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.6％。

注意事項(xiàng)

1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待 測 樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時(shí) 做 標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 洗滌過程 很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及 OD 值錯(cuò)誤地升高。

3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持 板條干燥 。

4. 本試劑盒宜置 4 o C冰箱保存。

5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！