薄層色譜法點(diǎn)樣應(yīng)注意的問題有哪些?
(1)點(diǎn)樣量:原點(diǎn)位置對(duì)樣品容積的負(fù)荷量有限,體積不宜太大,一般為 0.5~10μl,樣品的濃度通常為0.5~2mg,太濃時(shí)展開劑從原點(diǎn)外圍繞行而不是通過整個(gè)原點(diǎn)把它帶動(dòng)向前,使斑點(diǎn)拖尾或重疊,降低分離效率。點(diǎn)樣量太小,不能檢出清晰的斑點(diǎn)影響判斷。點(diǎn)樣量太多,展開劑不能全部負(fù)載,容易產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。當(dāng)點(diǎn)樣量適合時(shí),可采用點(diǎn)狀點(diǎn)樣;當(dāng)點(diǎn)樣量過大,原點(diǎn)無法負(fù)荷時(shí),可采用條帶狀點(diǎn)樣,得到更好的分離效果,提高分辨率。
(2)樣品的溶劑:樣品在溶劑中溶解度很大,原點(diǎn)將變成空心圓,影響隨后的線性展開,所以原則上應(yīng)選擇對(duì)被測(cè)成分可以溶解但溶解度不是很大的溶劑。供試液的溶劑在原點(diǎn)殘留會(huì)改變展開的選擇性,親水性溶劑殘留在原點(diǎn)吸收大氣中的水分(特別在高濕度環(huán)境)對(duì)色譜質(zhì)量也會(huì)產(chǎn)生影響,因此除去原點(diǎn)殘存溶劑是必要的,但對(duì)遇熱不穩(wěn)定和易揮發(fā)的成分,應(yīng)避免高溫加熱,以免成分被破壞或損失。