亚洲不卡一区二区av,国产精品乱一区二区三区,另类亚洲综合区图片小说区,99人妻精品日韩欧美一区二区`

關(guān)注公眾號(hào)

關(guān)注公眾號(hào)

手機(jī)掃碼查看

手機(jī)查看

喜歡作者

打賞方式

微信支付微信支付
支付寶支付支付寶支付
×

強(qiáng)大的基因組編輯工具-Crisp/cas9(二)

2021.3.01

三、 產(chǎn)品推薦

?

針對(duì)sgRNA和cas9,我們有如下產(chǎn)品可供選擇哦:

?

1.sgRNA系列。

?

(1)sgRNA載體類型

?

貨號(hào) 載體 啟動(dòng)子 sgRNA 是否含有Cas9核酸酶基因 篩選標(biāo)記/報(bào)告基因
SG001 pCRISPR-SG01 U6 1 或多個(gè) 無(wú),Cas9克隆單獨(dú)出售 Hygromycin
SG002 pCRISPR-LvSG03 U6 1 或多個(gè) 無(wú),Cas9克隆單獨(dú)出售 Puromycin / mCherry
SG012 pCRISPR-CG02 U6 1 有,載體含有CBh啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)的Cas9核酸酶基因 N/A
SG013 pCRISPR-CG04 U6 1或多個(gè) 有,載體含有CMV啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)的Cas9核酸酶基因 Neomycin / copGFP
SG014 pCRISPR-CG07 U6 1 有,載體含有CBh啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)的Cas9核酸酶基因 copGFP
SG015 pCRISPR-CG08 U6 1 有,載體含有CBh啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)的Cas9核酸酶基因 mCherry
pCRISPR-CG12 U6 1或多個(gè) 有,載體含有CMV啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)的Cas9核酸酶基因 Neomycin / mCherry

?

*配合單獨(dú)表達(dá)Cas9 核酸酶(Cat.No.? CP-C9NU-01,? CP-LvC9NU-01, CP-LvC9NU-02, CP-LvC9NU-08,? CP-LvC9NU-09,? CP-LvC9NU-10)或 Cas9 D10A切口酶(Cat.No.CP-C9NI-01,? CP-C9NI-02) 的 Cas9克隆使用。

?

還有有上述貨號(hào)對(duì)應(yīng)搭配使用的sgRNA亂序?qū)φ张?/p>

?

貨號(hào) 產(chǎn)品 篩選標(biāo)記 報(bào)告基因
CCPCTR01-CG02 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-CG02. Scrambled sgRNA control for pCRISPR-CG02. N/A
CCPCTR01-CG04 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-CG04 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-CG04
CCPCTR01-CG07 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-CG07 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-CG07
CCPCTR01-CG08 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-CG08 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-CG08 with mCherry
CCPCTR01-LvSG03 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-LvSG03 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-LvSG03 mCherry
CCPCTR01-SG01 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-SG01 Scrambled sgRNA control for pCRISPR-SG01 N/A

?

(2)還有sgRNA亂序?qū)φ章《绢w粒

?

貨號(hào) 產(chǎn)品 描述 啟動(dòng)子 篩選標(biāo)記 sgRNA
LPP-CCPCTR01-LvSG03-100 sgRNA 對(duì)照 CCPCTR01-LvSG03 的純化慢病毒顆粒(25 μL×4管) 108?TU/ml sgRNA 對(duì)照 CCPCTR01-LvSG03 的純化慢病毒顆,轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí) EF1a Puromycin CCPCTR01-LvSG03
LPP-CCPCTR01-LvSG03-400 sgRNA 對(duì)照 CCPCTR01-LvSG03 的純化慢病毒顆粒(100μL,25 μL×16管) 108?TU/ml sgRNA 對(duì)照 CCPCTR01-LvSG03 的純化慢病毒顆,轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí) EF1a Puromycin CCPCTR01-LvSG03

?



圖3. HUWEI-sgRNA/Cas9靶向HEK293T細(xì)胞中的HUWEI基因。(A)HUWEI-sgRNA與基因組PCR引物設(shè)計(jì);(B)在6孔板中,HUWEI-sgRNA/Cas9克隆與sgRNA/Cas9對(duì)照克?。ㄓ镜?)轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞。轉(zhuǎn)染40h后收集細(xì)胞,提取基因組DNA并用HUWE特異的PCR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,凝膠純化PCR產(chǎn)物,將純化后的產(chǎn)物與緩沖液混勻,經(jīng)變性、退火后在37℃水浴下T7 ENI剪切60min。HUWEI經(jīng)PCR后的產(chǎn)物片段長(zhǎng)度應(yīng)為520bp,T7 ENI剪切后的產(chǎn)物應(yīng)分別為330bp和190bp。

?


圖4. CRISPR-Cas9多重靶向編輯多個(gè)基因。實(shí)驗(yàn)組(1-4泳道)為Cas9表達(dá)克隆及分別表達(dá)靶向p53, HUWE1, NCL3 和 GFP基因的sgRNA克隆質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293t GFP穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞。對(duì)照組(5-8泳道)為Cas9表達(dá)克隆質(zhì)及隨機(jī)sgRNA表達(dá)克隆的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293t GFP穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞。通過(guò)T7核酸內(nèi)切酶檢測(cè)分析基因組DNA各個(gè)靶點(diǎn)上同時(shí)存在的插入缺失。*號(hào)標(biāo)記的條帶顯示Cas9核酸酶及分別靶向多個(gè)靶點(diǎn)的sgRNA都在目標(biāo)靶點(diǎn)上有效地誘發(fā)了插入缺失突變(1-4道)。PCR產(chǎn)物條帶及T7核酸內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物條帶大小:GFP: 720bp (完整), 340bp + 380bp (酶切); NCL3: 765bp (完整), 295bp +470bp (酶切); HUWE: 520bp (完整), 190bp + 330bp (酶切); P53: 825bp (完整), 475bp + 350bp (酶切).

?

(3)sgRNA 文庫(kù)

?

?

圖5. A:混合文庫(kù)篩選。對(duì)感染了sgRNA混合文庫(kù)的細(xì)胞株進(jìn)行篩選,獲取具備目的表型的陽(yáng)性細(xì)胞株進(jìn)行Sanger測(cè)序識(shí)別對(duì)應(yīng)的sgRNA,或通過(guò)深度測(cè)序搜索比例過(guò)高或過(guò)低的sgRNA。B:使用 sgRNAs 文庫(kù)array(獨(dú)立克隆文庫(kù))進(jìn)行基因敲除篩選。各板孔里的細(xì)胞株分別感染不同的sgRNA慢病毒顆粒,并篩選具備目的表型的陽(yáng)性細(xì)胞株。如此無(wú)需測(cè)序即可獲知與目的表型相關(guān)的sgRNA。

?


互聯(lián)網(wǎng)
推薦
關(guān)閉