一、實驗?zāi)康呐c意義 學(xué)習(xí)PCR操作技術(shù)，利用基因全長引物，擴增出查爾酮合成酶基因的全長，使學(xué)生掌握PCR的基本原理和操作。 二、實驗原理 聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ，PCR)是上世紀(jì)80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術(shù)，它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動化等突出優(yōu)點；能在一個試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時內(nèi)擴增至十萬至百萬倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個細(xì)胞中擴增出足量的DNA供分析研 究和檢測鑒定。因此，PCR技術(shù)是生物和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中的一項革命性創(chuàng)舉和里程碑。 PCR技術(shù)的基本原理：類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應(yīng)步驟組成：①模板DNA的變性：模板DNA加熱至93℃左右，雙鏈變?yōu)閱捂湥员闼c引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的鏈，重復(fù)變性--退火--延伸這三個過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需 2-4分鐘，2-3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達(dá)平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。 二、實驗儀器

三、實驗試劑? 1．dNTP Mix (上海生工) 2．Taqase plus（北京鼎國） 3．模板DNA：20 ng/μL 4．引物（委托上海生工合成，經(jīng)離心，用無菌ddH2O稀釋成20 nmoI/L

5．10×Taqase plus緩沖液 6．無菌ddH2O