摘要： 為了滿足廣泛開展BrdU標(biāo)記DNA檢測對BrdU特異性單抗的需要,我們制備了一株產(chǎn)生BrdU單抗的雜交瘤細(xì)胞株.本文對此細(xì)胞株制備過程及單抗鑒定情況作了簡單敘述.

BrdU單克隆 抗體 的制備及鑒定 中華 微生物 學(xué)和免疫學(xué)雜志 1999年第3期第19卷 基礎(chǔ) 免疫 學(xué) 作者：韓淑紅鄧鴻業(yè)徐志偉鄧玉蘭黃大無丁桂鳳 單位：100083 北京醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)系

DNA的5-溴,2’-脫氧尿嘧啶核苷（BrdU）標(biāo)記法近年來作為一種新的、簡便、敏感特異的檢測方法,在腫瘤生物學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)特別是 細(xì)胞增殖 動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,在一定程度推動(dòng)了相關(guān)學(xué)科的發(fā)展.

為了滿足廣泛開展BrdU標(biāo)記DNA檢測對BrdU特異性 單抗 的需要,我們制備了一株產(chǎn)生BrdU單抗的雜交瘤 細(xì)胞株 .本文對此細(xì)胞株制備過程及單抗鑒定情況作了簡單敘述.

　　由于BrdU是半抗原,需制備完全抗原BU-OVA進(jìn)行免疫,BU-OVA的制備方法是過碘酸鈉氧化法.BrdU單抗制備過程的關(guān)鍵是排除與胸腺嘧啶核苷(TdR)發(fā)生非特異交叉的抗體產(chǎn)生細(xì)胞,所以,還增加兩種用于篩選的抗原即BU-BSA和MU-BSA,其制備方法同BU-OVA.

　　融合用的細(xì)胞為BALB/c小鼠 骨髓 瘤細(xì)胞系Sp2/0,BALB/c小鼠供免疫和誘發(fā)單抗腹水.按常規(guī)方法融合篩選一株與BrdU反應(yīng)而與TdR無明顯交叉反應(yīng)的雜交瘤細(xì)胞株,經(jīng)克隆化培養(yǎng)后命名為4F4.用這株細(xì)胞接種于小鼠腹腔可產(chǎn)生富含抗體的腹水,其抗體類型為IgG類,ELISA法測其效價(jià)在1∶5000以上,FACS分析時(shí)稀釋度為

1∶400,BrdU體內(nèi)和體外法參入,FACS分析結(jié)果表明4F4單抗與未參入有BrdU的DNA無明顯交叉反應(yīng),并能很好反映參入BrdU的DNA含量的動(dòng)態(tài)變化.半抗原競爭抑制實(shí)驗(yàn)表明4F4單抗對BrdU的特異性很高,而與TdR無明顯結(jié)合現(xiàn)象.綜合以上鑒定結(jié)果,4F4單抗的敏感性和特異性都很高.

此外,由于發(fā)生BrdU參入的細(xì)胞一定要經(jīng)過細(xì)胞固定及DNA變性處理后才能用BrdU單抗作檢測,但處理能夠引起細(xì)胞凝聚及非特異吸附現(xiàn)象.所以,我們在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用BrdU標(biāo)記技術(shù)時(shí)注意克服了這些難點(diǎn),使4F4細(xì)胞株產(chǎn)生的BrdU單抗在對BrdU參入細(xì)胞的檢測中獲得了準(zhǔn)確而重復(fù)性高的結(jié)果.