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液相色譜方法開(kāi)發(fā)中紫外吸收波長(zhǎng)的選擇
液相色譜方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，樣品的紫外吸收波長(zhǎng)對(duì)開(kāi)發(fā)結(jié)果具有舉足輕重的影響。對(duì)于許多樣品而言，只有仔細(xì)選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)，才能得到良好的分離效果。選擇波長(zhǎng)時(shí)需了解各樣品組分的UV光譜，若能取得被測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)品，可較快獲得各樣品組分的UV圖譜，應(yīng)用DAD還可獲得大量的其他補(bǔ)充信息。
選擇吸收波長(zhǎng)一般包含（不限于）
以下幾種考慮
1、不光考慮目標(biāo)物的最大吸收波長(zhǎng)，同時(shí)要考慮樣品干擾物吸收值最小的波長(zhǎng)。
2、飽和烴類以及其氨基或氰基衍生物是僅有的一類完全不適合UV檢測(cè)的有機(jī)化合物。
3、被特定基團(tuán)（-O-、-OH、-Cl、-COOH、-COOR）取代的飽和烴類具有臨界吸收值，可能需在短波長(zhǎng)處（185-210nm）檢測(cè)。
4、除上述幾類化合物外，一般化合物都能在較長(zhǎng)波長(zhǎng)（>210nm）檢測(cè)。下表列出各種官能團(tuán)的最大波長(zhǎng)與摩爾吸收系數(shù)。
5、流動(dòng)相組分的紫外本底吸收。此項(xiàng)考慮涉及到溶劑的種類選擇、流動(dòng)相pH選擇以及流動(dòng)相緩沖鹽選擇等。有些酸有紫外本底，如甲酸，乙酸；有些沒(méi)有，如磷酸。這樣，在使用較低波長(zhǎng)檢測(cè)的方法時(shí)，就要考慮使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波長(zhǎng)檢測(cè)下應(yīng)該慎用。水在180nm以上實(shí)際無(wú)吸收，可忽略其影響。正相色譜所用溶劑的吸收度通常更強(qiáng)，所以一般需在長(zhǎng)波長(zhǎng)檢測(cè)。
6、最大吸收波長(zhǎng)λmax與化學(xué)結(jié)構(gòu)的關(guān)系。紫外光譜提供了分子中生色團(tuán)和助色團(tuán)的信息，目前雖不能精確計(jì)算紫外特征吸收峰，但已總結(jié)出各種經(jīng)驗(yàn)規(guī)則。最早提出的Woodward（伍德沃德）和Fieser（費(fèi)塞爾）規(guī)則可用來(lái)估算二烯烴，多烯烴及共軛烯酮類化合物的最大紫外吸收波長(zhǎng)。
