廣東佛山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科 　　莊健海

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摘要 應(yīng)用序列特異引物聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-SSP）技術(shù)對181例臨床標(biāo)本進(jìn)行HLA-B27檢測，同時(shí)作血清學(xué)試驗(yàn)。結(jié)果：PCR方法和血清學(xué)方法分析結(jié)果基本相符，PCR分型無假陽性及假陰性，血清學(xué)方法有1例假陽性及1例假陰性，表明PCR方法靈敏度高、特異性好、準(zhǔn)確、較之血清學(xué)方法更適合于臨床。

關(guān)健詞 PCR-SSP HLA-B27

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人類白細(xì)胞抗原B27（HLA-B27），是診斷強(qiáng)直性脊柱炎的指標(biāo)之一，對強(qiáng)直性脊柱炎的早期診斷和預(yù)后以及對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的鑒別診斷起著極其重要的作用。以前國內(nèi)大多采用血清學(xué)方法對HLA-B27進(jìn)行檢測，近來國內(nèi)外有報(bào)道應(yīng)用PCR技術(shù)對HLA-B27進(jìn)行檢測，具有簡便快速，靈敏度高，特異性好，準(zhǔn)確等特點(diǎn)。2001年3-6月，我科對全部進(jìn)行HLA-B27檢測的病人運(yùn)用PCR-SSP法進(jìn)行檢測的同時(shí)，也進(jìn)行了血清學(xué)檢測，現(xiàn)報(bào)告如下：

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1. 材料與方法

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1. 1材料

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1.1.1引物特異性引物有2個(gè)。B27引物序列為：P 1 5 1 -CAG,TCT,GTG,CCT,TGG,CGT,TGC;P 2 5 1 -GGC,TAC,GTG,GAC,ACG,CT.PC產(chǎn)物為144bp.5 1 -TCA,CGG,ATT,TCT,GTT,GTG,TTT,PCR產(chǎn)物429 bp.以上引物由美國G&T Biotecli公司提供

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1.1. 2臨床樣本 181份來源于臨床進(jìn)行HLA-B27檢測的患者

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1.1. 3PCR擴(kuò)增儀 購自上海復(fù)星公司,型號(hào)PTC-100

。

1.1.4電泳儀 上海西巴斯生物技術(shù)公司研制,型號(hào)DY-A

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1.1. 5HLA-B27分型血清板 由廣州醫(yī)學(xué)院神經(jīng)研究所提供,含陰陽性對照

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1.1. 6倒置顯微鏡 日本奧林巴斯光學(xué) 儀器 有限公司研制的CK-2

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1.2. 方法

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1.2.1摸擬DNA提取 取EDTA抗凝靜脈血0.3ml 采用快速酚氯仿抽提

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DNA。

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1.2.2PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)體至25μl，其中B27引物2μmol/L，

內(nèi)對照物1μmol/L,Mgcl2 2mmol/L 17.5mmol/Ltric,Kcl37.5mmol/L,

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DNTP200μmol/L,5%Dmso,Taq酶0.5μ模板DNA22.5μl

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