計(jì)算感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化率公式中的稀釋倍數(shù)
轉(zhuǎn)化后在含抗生素的平板上長出的菌落即為轉(zhuǎn)化子,根據(jù)此皿中的菌落數(shù)可計(jì)算出轉(zhuǎn)化子總數(shù)和轉(zhuǎn)化頻率,公式如下:
轉(zhuǎn)化子總數(shù)=菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×轉(zhuǎn)化反應(yīng)原液總體積/涂板菌液體積
轉(zhuǎn)化頻率(轉(zhuǎn)化子數(shù)/每ug質(zhì)粒DNA)=轉(zhuǎn)化子總數(shù)/質(zhì)粒DNA加入量(ug)
下面以大腸桿菌TG1電轉(zhuǎn)感受態(tài)為例給你演示一下:
第一天,上午取大腸桿菌TG1菌液劃線平板(一般要48小時(shí)以上才能長出單克?。?。
第三天,在長有單克隆的平板上挑一個(gè)生長狀態(tài)好的單克隆接到4ML新鮮培養(yǎng)基,過夜培養(yǎng)。
第四天,如你說的,按1:100擴(kuò)大培養(yǎng);OD達(dá)到0.5~0.6開始制備感受態(tài)細(xì)胞。
制備好的感受態(tài)細(xì)胞分裝到1.5 EP管中,一般為100 μl 每管
感受態(tài)效價(jià)的測定:
轉(zhuǎn)0.1 ng 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒到100 ul 的感受態(tài)細(xì)胞中,1.5 KV 電壓電擊,37度培養(yǎng)1小時(shí),稀釋涂布所謂的“稀釋倍數(shù)”是指這的稀釋一般情況下TG1電轉(zhuǎn)感受態(tài)的效價(jià)(即轉(zhuǎn)化頻率)在108~109所以反推預(yù)測,我們一般會(huì)稀釋10-2~10-3梯度來涂布。如果涂布50 ul,假設(shè)在10-2板上N個(gè)菌落,
套公式:
轉(zhuǎn)化子總數(shù)=菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×轉(zhuǎn)化反應(yīng)原液總體積/涂板菌液體積
轉(zhuǎn)化子總數(shù)=N×102×100/50=2N×102
轉(zhuǎn)化頻率(轉(zhuǎn)化子數(shù)/每ug質(zhì)粒DNA)=轉(zhuǎn)化子總數(shù)/質(zhì)粒DNA加入量(ug)
轉(zhuǎn)化頻率=2N×102/10-4(0.1 ng=10-4 ug)=2N×10